HepDART 2019：埃默里大學更新在研乙肝新藥GLP

目前批準的抗HBV藥物不能消除感染細胞中的cccDNA，而一些實驗性衣殼裝配調節劑（CAMs）在HBV病毒復制的幾個步驟中都具有重要影響，包括衣殼裝配，逆轉錄，前基因組RNA（pgRNA）和聚合酶蛋白包繞。

在本次HepDART 2019 大會上，埃默里大學醫學院研究人員描述了乙二酰胺衍生物GLP-26在體外和人源化小鼠中誘導抗病毒反應的研究結果。

研究方法

使用穩定轉染的HepAD38細胞，HepG2- NTCP感染系統和原代人肝細胞來確定體外結果。如先前所述，在HUHEP小鼠中進行了體內測定(Strick-Marchand H et al., PLoS 2015)。藥物相互作用在HepAD38和HUHEP模型中使用GLP-26聯合恩替卡韋（ETV）或在PHH中使用GLP-26和TDF進行測定。

病毒學測量包括：用 TaqMan PCR（qPCR）測量 HBV DNA 擴增或 cccDNA，通過RT-PCR 測量前基因組和表面RNA，以及用 ELISA測量分泌的 HBeAg 或 HBsAg。

還對帶有HBV Cp149二聚體或衣殼樣品進行電子顯微鏡觀察，使用熱移熒光和共聚焦顯微鏡（使用HepAD38細胞）對帶有HBV Cp149衣殼的樣品進行觀察。在小鼠，大鼠，狗和人血漿中或在小鼠和人肝微粒體中進行穩定性測定。通過MTT / MTS分析在幾種細胞類型中進行細胞毒性測定，并在HepG2或Huh7細胞水平使用GSH-GloTM谷胱甘肽分析進行細胞毒性測定。

研究結果

GLP-26表現出一位數的納摩爾抗HBV分泌活性，抑制pgRNA（EC50 = 0.11μM）和HBeAg 產生（EC50 = 0.003μM），并降低cccDNA擴增。令人驚訝的是，在人源化小鼠模型中長期聯合恩替卡韋治療可導致病毒載量和病毒抗原減少，在治療停止后可維持長達12周，且無細胞毒性跡象。

作用機理研究表明，GLP-26 通過抑制 pgRNA衣殼化來加速空衣殼的衣殼組裝動力學，從而阻止病毒DNA復制。

這些結果表明，GLP-26：

1）是體外無毒的 HBV DNA，HBeAg 和 cccDNA產生抑制劑，肝癌細胞中高達25μM的 GSH 水平無變化；

2）穩定的HBV衣殼顆粒并誘導其在細胞質中的積累；

3）誘導形成堅固的HBV衣殼顆粒；

4）能使感染HBV的人源化小鼠 HBV DNA ，HBsAg 和 HBeAg 水平降低；

5）與ETV聯合用藥具有協同作用，在感染HBV的人源化小鼠中具有長期持續的治療后減少病毒DNA和抗原的作用；

6）在小鼠和食蟹猴中具有良好的體外和體內藥代動力學特征。

總而言之，與GLP-26的聯合用藥可能代表了一種可阻止 cccDNA 形成的HBV功能性治愈或滅菌性治療。（更多肝病新藥研究信息敬請關注“肝臟時間”微信公眾號）！